近年来，随着研究的进展，人类对肿瘤和免疫的认知越来越深刻，免疫疗法也由此蓬勃发展。在抗体药物研发方面，从1986年FDA批准第一款治疗性单克隆抗体药物上市以来，全球已累计超100款抗体药物上市，这类药物革新了自身免疫性疾病、肿瘤等多种疾病的治疗。
在技术迭代方面，双特异性抗体接连获得突破的同时，在差异化研发的背景下，三特异性抗体也拉开了序幕。那么什么是三抗？目前研发进展如何？
三抗拥有三种特异性抗原结合位点，可以同时与靶细胞与功能细胞相互作用，进而增强对靶细胞的杀伤。三抗不仅能像双抗一样，与靶细胞相关抗原和激活功能细胞的受体相结合，还能够与功能细胞表面的另一个靶点相结合，有利于将药物重定向至肿瘤局部，增加结合特异性，提升药物靶向肿瘤细胞的准确性，降低脱靶毒 性，增强抗肿瘤能力。
三抗一般使用可变结构域基因创建，与双抗相比，具有更广阔的应用空间，可以达到同时桥接并激活免疫细胞，或桥接免疫细胞并阻断双信号通路等作用；其中，同时桥接与激活免疫细胞这种机制与人体免疫系统息息相关，对靶细胞有着很强的杀伤作用。
目前，全球尚无三抗药物获批上市，不过已有一批企业参与三抗的研发。
Harpoon Therapeutics：HPN536
HPN536是Harpoon Therapeutics研发的一款靶向CD3/MSLN/HAS的三特异性抗体，可与表达间皮素的肿瘤细胞及T细胞上的CD3结合从而导致T细胞活化和有效的重定向靶细胞裂解，目前正在进行针对实体瘤的II期临床试验。
其中MSLN（间皮素）是一种糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定的细胞表面糖蛋白，在正常组织中低表达的同时在许多癌症中过度表达，作为一种肿瘤特异性抗原成为了肿瘤治疗的理想靶点之一。
除HPN536外，Harpoon Therapeutics还研发了靶向CD3/PSMA/HAS 的三抗HPN424以及靶向CD3/BCMA/HAS的HPN217。
Dragonfly Therapeutics：DF1001
DF1001是Dragonfly Therapeutics研发的同类首 创的三特异性NK细胞结合疗法，其利用HER2作为锚点来调节先天性和适应性免疫；通过重定向NK和CD8+ T细胞以重新编程肿瘤微环境，使冷肿瘤变热。在今年ASCO会议上公布的研究结果显示，36例晚期/难治性实体瘤患者接受了剂量递增治疗，68例接受了安全性/药效学扩展治疗。在5例患者中观察到部分缓解（PR），持续时间长达13个月。22例患者疾病稳定（SD)，临床受益率（CBR）为39.7%，应答者包括难治性肺癌和乳腺癌患者。安全性方面，79%的患者报告了治疗相关不良事件（TRAE），TRAEs大多为1-2级。
在这项剂量递增研究中，DF1001单药治疗在HER2+难治性实体瘤患者中显示出有潜力的抗肿瘤活性。这一数据支持研究人员进一步探索DF1001单药治疗和联用，以作为实体瘤患者的潜在新型治疗选择。
赛诺菲：SAR443216、SAR442257
赛诺菲在三抗药物的布局由来已久，除了SAR443579外，还有SAR443216和SAR442257。
SAR443216靶向CD3/CD28/HER2，其不仅能利用CD8+ T细胞对肿瘤细胞进行直接杀伤，而且会通过CD4+ T淋巴细胞抑制乳腺癌细胞的生长，为HER2乳腺癌的治疗提供了新的药物开发可能，并探索了CD4+ T细胞前所未有的新机制。目前该药物处于I期临床试验阶段。
SAR442257靶向CD3/CD28/CD38，是在传统CD3双抗的基础上引入CD28，形成同时靶向CD3/CD28/CD38的三抗。其除了与CD3受体结合，还携带了与共刺激受体CD28结合的蛋白域，同时激活CD28信号通路可以促进激活后T细胞的生存以及产生T细胞记忆。在体外试验中，SAR442257表现出比CD38单克隆抗体高1000~10000倍的骨髓瘤细胞杀伤活性，拟用于治疗复发/难治性多发性骨髓瘤（MM）和非经典霍奇金淋巴瘤（NHL）患者。
基石药业/ Numab Therapeutics：ND021
ND021是由基石药业和Numab共同开发的一款靶向PD-L1/4-1BB/HAS的三抗药物，其由三个稳定抗体Fv片段组成，可同时结合PD-L1、4-1BB和人血清蛋白（HSA）三个靶点。根据设计，ND021仅在与肿瘤细胞表面上的PD-L1结合时才会与4-1BB的独特抗原表位相结合，激活抗肿瘤T细胞，从而可避免出现传统4-1BB激动剂单抗在人体试验中观察到的肝毒 性。另外，通过结合HSA，ND021可拥有更长的半衰期，从而降低患者的给药频率。还有望克服对PD-1/L1抗体的原发性和继发性耐药。因此，ND021有成为同类最 佳药物的潜力。
在2022 AACR年会上，基石药业公布了ND021的临床前研究数据，结果表明：ND021单药疗法在冷、热肿瘤模型中均有疗效；与CD3 T细胞诱导剂联合使用可增强抗肿瘤活性，促进肿瘤内部CD8记忆T细胞形成；药代动力学/药效学模型数据显示，ND021可在较宽的剂量范围内同时达到最 佳的PD-L1抑制与4-1BB激活，从而有利于临床剂量的选择。
博锐生物/恩沐生物：BR110
BR110是恩沐生物基于其TRIAD平台开发的一款三抗产品，博锐生物已与其达成独家合作和授权。BR110靶向CD3/CD19/CD20，能够同时靶向T细胞表面的CD3以及肿瘤细胞上的两个不同的生物标志物CD19和CD20，通过募集T细胞杀死表达CD19和/或CD20的肿瘤细胞。
有研究表明，R-CHOP治疗淋巴瘤复发患者有近30%存在CD20丢失或下调，CAR-T治疗淋巴瘤也普遍存在CD19丢失或下调。针对以上现象，由于BR110与肿瘤细胞表面的CD19和CD20具有很高的亲和力，因此可有效解决其他单一靶向疗法因靶点丢失或下调导致耐药或复发问题，不仅可以靶向CD19+/CD20+的弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL），还可以针对CD19-/CD20+和CD19+/CD20痕量表达的DLBCL。
嘉和生物：GB263T
GB263T是嘉和生物研发的一款靶向EGFR/cMET/cMET的三特异性抗体，能够靶向EGFR和两个不同cMET表位，这一设计是为了增强其安全性和有效性。因此，GB263T具有高度差异化的设计，表现出多种作用机制，可同时抑制原发性及继发性EGFR突变及cMET信号通路，下调EGFR与cMet蛋白表达水平，并有效诱导EGFR及cMet的内吞。
临床前研究表明，GB263T有效阻断了EGFR和cMET的配体诱导磷酸化，并显示出对EGFR和cMET信号通路较好的双重抑制。同时，GB263T有效诱导了EGFR和cMET的内吞，并显著降低EGFR与cMET的蛋白表达水平。在EGFR外显子20插入、EGFR外显子19缺失，以及C797S突变和各种cMET表达异常等几种不同的肿瘤模型中，GB263T均表现出显著的剂量依赖性肿瘤抑制作用。
百利药业：GNC-038、GNC-035、GNC-03
在三抗崭露头角的同时，四抗药物也开始兴起。四抗药物通过引导并调控活化后的免疫细胞浸润并靶向攻击肿瘤组织和肿瘤细胞，最后形成可有效抑制和清除肿瘤的“肿瘤特异性的激发型免疫亚稳态”，有望实现对肿瘤的治疗。百利药业是四抗领域知名的生物医药企业，拥有多特异性抗体GNC技术平台，可以在IgG基础上串联3个scFv搭建成对称的四特异性抗体。
GNC-038是首 个获批进入临床的四特异性抗体药物，具有靶向CD19、CD3、PD-L1和4-1BB四个抗原的结构域，通过抗CD19、PD-L1结构域靶向并杀伤肿瘤细胞。目前处于II期临床阶段。
GNC-035是百利药业基于GNC平台开发的四抗产品，同时靶向PD-L1/CD3/4-1BB/ROR1，目前正处于临床I期试验阶段。
GNC-039靶向PD-L1/4-1BB/CD3/EGFR的四抗产品，针对的是晚期恶性实体瘤，特别是脑胶质瘤。在靶点选择上进行差异化创新。2020年12月，GNC-039临床试验获CDE批准。
目前，在单抗竞争白热化的背景下，多特异性抗体成为医药研发领域的热点。国内创新三抗药物及四抗药物不断涌现，正反映了我国生物医药行业稳步发展、欣欣向荣的趋势。当下中国的三抗领域仍处在早期阶段，机制研究正处于萌芽阶段，不过已经开发了不同的技术途径。未来或许会有更多生物医药企业利用自身研发优势不断加入。值得注意的是，尽管三抗药物增加了特异性抗原结合位点，降低了脱靶毒 性，但其疗效和安全性仍需进一步验证。
参考：
1.https://www.innate-pharma.com/media/all-press-releases/innate-pharma-announces-publication-preclinical-data-trifunctional-nk-cell-engager-acute-myeloid-leukemia-nature-biotechnology.
2. Lan Wu et al.Trispecific antibodies enhance the therapeutic efficacy of tumor-directed Tcells through T cell receptor co-stimulation. Nature Cancer(2019).
3. CDE官网、各公司官网.
