本文亮点:
在活细胞内利用双光子荧光技术检测了单个RNA与蛋白质的结合
对细胞不同区域内与mRNA结合的蛋白质进行了定量检测
在不同时空条件下对mRNA与ZBP1和核糖体的相互作用进行了定量检测
ZBP1抑制核糖体与β-actin mRNA在核周部位的结合,但不影响其他部位
mRNA是细胞在基因转录过程中合成出来的携带编码信息的重要RNA,mRNA要实现在细胞特定时空条件下的可调控性表达需要与特定结合蛋白进行结合,调节其稳定性。了解这一过程对于许多疾病的治疗和药物开发都具有重要意义。为深入理解这一过程,需要开发一种方法在亚细胞水平对单个活细胞内RNA-蛋白质之间发生的相互作用进行研究。
在本研究中,研究人员利用双光子荧光涨落分析技术将内源性单个RNA和蛋白的检测结合起来,对活细胞特定区域内与mRNA结合的蛋白质的平均数目进行了测量。研究人员利用这种方法对原代成纤维细胞和神经元细胞亚细胞区域内ZBP1和核糖体与β-actin mRNA的结合进行了定量分析。结果发现ZBP1-mRNA的结合不会发生在细胞核内,这一结果与之前的一些研究相反。研究人员进一步研究发现与成纤维细胞相比,ZBP1与β-actin mRNA在神经元细胞核周部位的相互作用更强。
这项研究利用双光子荧光技术对mRNA-蛋白质的相互作用进行了定量检测,对于研究结合蛋白如何在不同时空环境下影响mRNA表达具有重要意义。